化学定量

		组织学的研究方法

组织和细胞化学定量术　　旨在对细胞形态结构及其化学成分的定量研究。组织化学是以反应产物做定位和定性研究，以往常用“＋”号表示，一般分为０～+ + + + + 五个等级，这种方法没有明确的客观指标，误差较大，特别是对于差别小的样品更无法准确判断。　　随着生命科学研究的不断深入，定量技术的应用日益广泛，并取得了很大的进展。目前常用以下方法对组织和细胞形态结构及化学成分进行定量研究，以阐明组织和细胞的生长、发育、分化、代谢和功能的变化以及对各种因素的反应。　　１.细显微分光光度定量术　　是应用显微分光光度计（microspectrophotometer)对组织和细胞内化学成分进行定量分析的技术。其基本原理是细胞内某种物质的含量不同，其杂色反应的深浅一，对一定波长的光吸收也不同，可通过测定其光密度值(OD值)进定量分析比较。　　２.形态计量术　　形态计量术(morphometry)是运用数学和统计学原理对组织和细胞内各种成分的数量、体积、表面积等的相对值与绝对值的测量,其中以研究组织和细胞内某种结构的三维立体结构的研究称体视学(sterology)。传统的方法是将规则的测试系统 (点、线、方格等)投影或覆盖在一张张连续切片上,将平面测量的数据,按数学原理和公式推算出立体结构数值,经过微机处理,重新建立起立体形象；当今，则应用图像分析仪(image analyzer) 进行组织,细胞三维结构及定量分析的研究，目前已获得了大量研究成果,如正常人肺泡量和表面积、肾小体数目和体积、胰岛的数量及其各类细胞的数值、小肠上皮细胞微绒毛的数量及其表面积等。组织化学和免疫组织化学染色、荧光素染色、放射自显影以及原位杂交等标本均可应用图像分析仪测定其光密度值进行定量分析。这些数值以“量”的概念阐述了结构与功能的关系及病理状态下的变化。　　3.X线显微分析术　　应用x线显微分析器(X-ray microanalyzer)探测细胞或组织的微小区域内元素成分的技术，在新型的扫描电镜与透射电镜均装配有该装置。可对样品中的元素进行定性和定量分析，常用的为能谱分析法，根据所测谱峰以确定细胞局部区域内所含元素的性质及元素的相对含量。　　4.流式细胞术　　流式细胞术 (flow cytometer ，FCM)又称荧光激活细胞分类技术（fluorescent activated cell sorter,FACS)是进行细胞定量分析研究和细胞分类研究的新技术，它是流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术综合性的高科技产品。将细胞悬液用荧光素染色后,使其通过流式细胞仪，该仪器能精确的计数荧光强度不同的细胞，并能使荧光强度不同的细胞向不同方向偏离，分别收集，以达到收集不同类别细胞的目的,分类速度很高，可达到每秒5000～10000个细胞，纯度在90%～99%之间。流式细胞术用以研究细胞周期中各时相细胞的比例、细胞动力学、免疫学、肿诊断等的研究。