电子显微镜

		组织学的研究方法

电子显微镜技术　　３．冷冻蚀刻复型术　　冷冻蚀刻复型（freeze etch replica ）是电镜样品的一种制备技术，以显示细胞、组织微细结构科的立体构像。其样品制备步骤如下：①冷冻：先把组织浸入含有20％～30％的甘油生理盐水的冷冻保护剂中，以防止冰晶形成和提高冷冻速度，然后把组织放入液氮（-196℃) 内快速冻结；②断裂在低温真空内，把冻结的组织用钢刀劈开，断裂面常为组织、细胞的薄弱部位，如膜的双层类脂质分子的疏水极之间余下部分的表面要观察的部位　冷冻蚀刻；③蚀刻：在真空内将温度回升到-100℃，使断裂面的冰　　　　　　　　　　　　　　　复型术升华，形成凹凸不平的形态；④复型:在断裂面以45°角喷镀一层铂膜，以增加图像的反差和立体感，再喷镀一层碳膜以加固铂膜。然后用次氯酸钠等腐蚀液除去组织，捞取复型膜在透射电镜下观察。　　冷冻蚀刻复型技术是研究细胞膜相结构的重要手段。细胞膜的双层类脂质层被劈分开后，其外层的内表面称胞质外面或E面（extracellular face，E-face）；其内层的外表面称胞质面或P面（plasllllc face，P-face）；在P面常可见许多直径6～9nm的膜内粒子，而E面则较少。一般认为腹内粒子是细胞膜和细胞内膜相结构中的镶嵌蛋白质粒子的图像，膜内粒子的数量与分布随膜的功能状态而变化。因此，可应用冷冻蚀刻复型求研究膜结构与功能的关系。　　4.冷冻割断术（ freeze cracking）　　将固定组织经过处理后。置于特制的冷冻台上，浸于二甲基亚砜中，低温下将组织割断，断面喷镀合金，在扫描电镜下观察组织结构断面的立体图像。