组织化学和细胞化学

		组织学的研究方法

组织化学和细胞化学　　组织化学（histochemistry)和胞化学（cytochemistry）技术的基本原理是在组织切片上或被检材料上，加一定试剂，使它与组织或细胞中待检物质发生化学反应成为有色沉淀物，以用光镜观察，若为重金属沉淀，可以用电镜观察，称电镜组织化学（electron microscope histochemistry)。这种方法可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类。核酸与某些多属元素等。如进一步应用显微分光光度计等测定标本中沉淀物的强度，则能较精确地进行定量研究。　　1. 糖类显示法　　最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖的方法是过碘酸-雪夫反应（periodic acid Schiff，PAS反应)。基本原理是：糖被强氧化剂过碘酸（HIO4)氧化后，形成2-醛基；后者与Schiff试剂中的无色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色反应产物,PAS反应阳性部位即表示多糖的存在。　　2. 酶类显示　　细胞内含有多种酶,每一种酶可催化一定的化学反应。酶的显示法是通过显示酶的活性来表明酶的存在，而不是酶的本身。将具有酶活性的组织放人含有一定底物的溶液中孵育，底物经酶的作用形成初级反应产物，它再与某种捕捉剂相反应,形成显微镜下可视性沉淀,即最终反应产物。　　如欲显示细胞内酸性磷酸酶,先将切片放入含有酶底物(常用β-甘油磷酸钠)的溶液（PH5.0) 中孵育，底物经酶的作用，水解并释放出磷酸；用捕捉剂硝酸铅与磷酸反应，形成微细的磷酸铅沉淀，此时，可在电镜下检出；如再用硫化铵处理时，磷酸铅被置换成硫化铝沉淀，可在光镜下见到。　　3．脂类显示　　脂类物质包括脂肪与类脂。标本可用甲醛固定、冷冻切片、用油红、苏丹Ⅲ、苏内Ⅵ、苏丹黑B、尼罗蓝等脂溶性染料染色；亦可用饿酸固定兼染色，脂类呈黑色。　　4．核酸显示法　　显示DNA的传统方法为Feulgen反应。切片先经稀盐酸处理后，使细胞内DNA水解，打开DNA分子中胶氧核糖核酸和嘌呤碱之间的连接按键，使其释放出醛基，再用Schiff试剂处理，形成紫红色反应产物。　　如用甲基绿-派若宁反应，可同时显示细胞内的DNA和RNA甲基绿与细胞核中的DNA结合呈蓝绿色，派若宁与核仁及胞质内的RNA结合呈红色。